江蘇知原藥業(yè)通過(guò)IVRT與IVPT試驗(yàn)在地奈德乳膏和洗劑生物等效性BE研究

2025年10月3日江蘇知原藥業(yè)股份有限公司的Om Sambhaji Shelke研究團(tuán)隊(duì)在《Journal of Pharmaceutical Innovation》（IF=5.2）期刊發(fā)表了一項(xiàng)題為“IVRT and IVPT of Desonide Lotion and Cream: Correlation with Human Bioequivalence Study"研究。針對(duì)外用制劑傳統(tǒng)臨床終點(diǎn)生物等效性研究成本高、耗時(shí)長(zhǎng)、流程復(fù)雜的問(wèn)題，開發(fā)并驗(yàn)證了地奈德（Desonide）乳膏和洗劑的體外釋放試驗(yàn)（IVRT）與體外滲透試驗(yàn)（IVPT）方法，結(jié)合皮膚發(fā)白試驗(yàn)，建立了外用制劑的生物等效性評(píng)估體系。

摘要

背景：外用生物等效性（BE）研究對(duì)于批準(zhǔn)價(jià)格親民且安全性和有效性與原研藥相當(dāng)?shù)姆轮扑?/span>很重要。然而，外用制劑的傳統(tǒng)臨床終點(diǎn)研究成本高昂、耗時(shí)漫長(zhǎng)且流程復(fù)雜。本研究探索了體外釋放試驗(yàn)（IVRT）和體外滲透試驗(yàn)（IVPT）方法，并通過(guò)生物等效性研究進(jìn)一步評(píng)估制劑。

方法：IVRT方法以pH 4.0醋酸緩沖液中的50%乙醇為受體介質(zhì)，采用尼龍66合成膜開發(fā)并驗(yàn)證，該方法具有良好的線性、精密度、靈敏度和穩(wěn)健性。IVPT方法以豬皮作為人體皮膚的替代模型，生理鹽水為受體介質(zhì)，旨在實(shí)現(xiàn)測(cè)試制劑與參比制劑的累積滲透率和滲透速率具有可比性。皮膚發(fā)白試驗(yàn)分別納入18名和100名受試者。

結(jié)果：IVRT試驗(yàn)中，洗劑的測(cè)試制劑與參比制劑90%置信區(qū)間為97.78%107.1%，乳膏為93.5%112.8%（符合75%133.33%的接受標(biāo)準(zhǔn)）；乳膏和洗劑的測(cè)試制劑與參比制劑均在24小時(shí)達(dá)到滲透速率（Jmax），其T/R比分別為100.0%和110.0%（90%置信區(qū)間符合80%125%標(biāo)準(zhǔn)）；累積滲透率的T/R比分別為95.2%（乳膏）和104.5%（洗劑）。滲透試驗(yàn)后，乳膏測(cè)試制劑和參比制劑的平均回收率分別為97.4±7.7%和101.6±10.5%，洗劑分別為88.2±5.1%和86.8±3.9%。IVRT和IVPT結(jié)果均證實(shí)了生物等效性，皮膚發(fā)白試驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證了測(cè)試制劑的生物等效性。

結(jié)論：研究結(jié)果表明，測(cè)試制劑與參比制劑具有相似的釋放和滲透特性，支持其在人體中的生物等效性。這種整合方法凸顯了IVRT和IVPT作為外用皮膚藥物制劑開發(fā)和體外生物等效性評(píng)估的可靠工具的應(yīng)用價(jià)值。

實(shí)驗(yàn)材料與儀器

材料

制劑：含0.05%地奈德的乳膏和洗劑。

試劑與化學(xué)品：所有用于IVRT和IVPT研究的試劑和化學(xué)品均為分析純，購(gòu)自當(dāng)?shù)毓?yīng)商。

皮膚樣本：1月齡巴馬仔豬的腹部前側(cè)皮膚。

儀器

透皮擴(kuò)散系統(tǒng)、高效液相色譜儀、高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀、ASCH VAPOSCAN經(jīng)皮水分流失測(cè)量?jī)x、冷凍研磨機(jī)、分光光度計(jì)。

實(shí)驗(yàn)過(guò)程

IVRT方法開發(fā)與驗(yàn)證

• 受體介質(zhì)選擇：基于地奈德在不同介質(zhì)中的溶解度和化學(xué)穩(wěn)定性，篩選出pH 4.0醋酸緩沖液中的50%乙醇作為受體介質(zhì)。

• 膜選擇：通過(guò)藥物回收率和雜質(zhì)分析，確定尼龍66合成膜為適配膜。

• 采樣時(shí)間設(shè)定：設(shè)定0.5h、1h、2h、3h、4h、6h為采樣時(shí)間點(diǎn)，確保藥物釋放線性關(guān)系良好（R2≥0.97）。

• 方法驗(yàn)證：對(duì)線性范圍、精密度、靈敏度、選擇性、回收率、質(zhì)量平衡和穩(wěn)健性等參數(shù)進(jìn)行驗(yàn)證，確認(rèn)方法可靠。

IVPT方法實(shí)施

• 皮膚處理：仔豬腹部皮膚經(jīng)脫毛、無(wú)菌分離后，-20℃冷凍儲(chǔ)存（有效期2個(gè)月），使用前恢復(fù)至室溫，切成直徑約3cm的圓盤，厚度控制在500±250μm，經(jīng)TEWL分析（數(shù)值<25g/m2/h）確認(rèn)皮膚完整性。

• 樣本設(shè)計(jì)：采用單劑量、兩處理、平行、每處理多重復(fù)設(shè)計(jì)，將測(cè)試和參比制劑隨機(jī)分配至A、B組。

• 試驗(yàn)條件：受體介質(zhì)為脫氣的pH 7.4磷酸鹽生理鹽水，溫度維持在34℃，攪拌速度600rpm，確保皮膚溫度穩(wěn)定在32±1℃；采樣時(shí)間點(diǎn)為0h、2h、4h、8h、12h、24h，采樣后補(bǔ)充等量新鮮介質(zhì)。

• 將皮膚固定于透皮擴(kuò)散池并預(yù)先恒溫至 32 ℃±1 ℃后，使用ASCH VAPOSCAN經(jīng)皮水分流失測(cè)量?jī)x在皮片上等距取點(diǎn)完成三次平行測(cè)定，記錄經(jīng)皮水分流失（TWEL）數(shù)值。經(jīng)測(cè)定，CT 組、CR 組、LT 組和 LR 組的平均經(jīng)皮水分流失結(jié)果（n=18）分別為 8.361±0.85、8.367±0.99、9.811±1.58 和 9.889±1.51，所有結(jié)果均符合本研究的預(yù)設(shè)標(biāo)準(zhǔn)。

ASCH VAPOSCAN經(jīng)皮水分流失測(cè)量?jī)x

• 藥物提取與分析：試驗(yàn)結(jié)束后，刮取皮膚表面殘留制劑，提取皮膚中滲透的藥物，結(jié)合受體介質(zhì)中的藥物含量，進(jìn)行質(zhì)量平衡計(jì)算。

皮膚發(fā)白試驗(yàn)

• 初步研究：納入18名健康中國(guó)受試者，確定參比制劑的半數(shù)有效劑量持續(xù)時(shí)間。

• 主要研究：采用隨機(jī)、雙盲、安慰劑對(duì)照、單劑量、交叉試驗(yàn)設(shè)計(jì)，納入100名健康受試者，在受試者前臂涂抹不同劑量的測(cè)試和參比制劑，于給藥后不同時(shí)間點(diǎn)通過(guò)分光光度計(jì)測(cè)量皮膚發(fā)白程度，評(píng)估藥代動(dòng)力學(xué)終點(diǎn)。

分析方法驗(yàn)證

• HPLC分析（IVRT樣本）：以pH 4.0醋酸溶液-乙醇（50:50）為稀釋劑，采用Zorbax Eclipse XDB-C8色譜柱，柱溫20℃，檢測(cè)波長(zhǎng)245nm，流動(dòng)相A（0.1%磷酸）與B（乙腈）比例58:42，流速1.0mL/min。

• LC-MS/MS分析（IVPT樣本）：采用ACE Excel 2 C18-AR色譜柱，柱溫40℃，流動(dòng)相A（0.1%甲酸水溶液）與B（乙腈）梯度洗脫，流速0.3mL/min，電離模式為ESI+，MRM掃描模式。

實(shí)驗(yàn)結(jié)論

本研究開發(fā)并驗(yàn)證了地奈德乳膏和洗劑的IVRT和IVPT方法，兩種方法均表現(xiàn)出良好的可靠性和穩(wěn)健性。IVRT和IVPT結(jié)果顯示，測(cè)試制劑與參比制劑的釋放和滲透特性具有可比性，90%置信區(qū)間均在生物等效性接受范圍內(nèi)；皮膚發(fā)白試驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)了兩者在人體中的生物等效性。該研究確立的整合評(píng)估方法，不僅減少了外用制劑生物等效性研究對(duì)昂貴、耗時(shí)的臨床研究的依賴，還為仿制藥的安全性和有效性提供了有力保障，為外用類固醇制劑及其他外用皮膚藥物的仿制藥審批提供了高效、可靠的技術(shù)路徑。

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